抗性淀粉檢測(cè)可以影響人和動(dòng)物日糧中各種養(yǎng)分的消化與吸收,對(duì)人的健康有利。在延緩糖尿病人餐后血糖上升、肥胖控制、預(yù)防腸道疾病、降低血中膽固醇和能量消化率等具有重要的生理功能。

　　

　　抗性淀粉檢測(cè)原理

　　

　　樣品經(jīng)前處理后，先在沸水浴中經(jīng)耐高溫α-淀粉酶水解，使可消化淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖，離心，棄去上清液，沉淀加入一定濃度的KOH使之溶解，經(jīng)葡萄糖淀粉酶作用將其轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用葡萄糖試劑盒測(cè)定葡萄糖含量，乘以0.9即換算成抗性淀粉含量。

　　

　　用于抗性淀粉檢測(cè)的儀器設(shè)備

　　

　　a)離心機(jī)

　　

　　b)電熱恒溫水浴鍋

　　

　　c)酸度計(jì)

　　

　　d)分光光度計(jì)

　　

　　e)電子分析天平

　　

　　f)容量瓶（100mL、1000mL）

　　

　　選擇的試劑

　　

　　除特殊說(shuō)明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。

　　

　　a)乙mi

　　

　　b)耐高溫α-淀粉酶（120,000NU/mL）

　　

　　c)2mol/L氫氧化鉀溶液

　　

　　d)磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

　　

　　分別稱取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g,，加適量水使其溶解，定容至1000mL。

　　

　　e)醋酸鹽緩沖液(pH4.4)

　　

　　分別量取0.2mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2mol/L醋酸鈉溶液19.5mL混勻。

　　

　　f)葡萄糖淀粉酶（100,000U/mL）

　　

　　g)2mol/L鹽酸溶液

　　

　　h)葡萄糖試劑盒

　　

　　樣品前處理

　　

　　糧食、豆類、糕點(diǎn)、餅干等較干燥的樣品

　　

　　稱取2g～5g（到0.001g）磨碎過(guò)40目篩的樣品，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30mL乙mi分三次洗去樣品中脂肪，棄去乙mi。

　　

　　蔬菜、水果、各種糧豆含水熟食制品

　　

　　按1：1加水在組織搗碎機(jī)中搗成勻漿（蔬菜、水果需先洗凈、涼干，取可食部分）。稱取5g～10g勻漿（液體樣品可直接量取），于250mL錐形瓶中，加30mL乙mi振搖提取（除去樣品中脂肪），過(guò)濾去除乙mi，再用30mL乙mi淋洗兩次，棄去乙mi。

　　

　　抗性淀粉檢測(cè)含量測(cè)定

　　

　　抗性淀粉提取及轉(zhuǎn)化

　　

　　取0.5g試樣放入50mL離心管，加入10mL(pH5.8)磷酸鹽緩沖溶液和1mL耐高溫α-淀粉酶，沸水浴30min，冷卻至室溫，離心(5000r/min，20min)棄上清液；加入10mL蒸餾水，洗滌沉淀，離心棄上清液(該步驟至少重復(fù)一次)，加入6mL2mol/LKOH溶解沉淀，室溫下振蕩30min，促進(jìn)沉淀溶解，以2mol/LHCl調(diào)pH至中性，加入5mL醋酸鹽緩沖液(pH4.4)和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。離心(5000r/min，20min)，收集上清液，再用10mL蒸餾水洗滌沉淀(該步驟重復(fù)兩次)，離心(5000r/min，20min)，取上清液。合并所收集上清液，定容至100mL容量瓶中。用葡萄糖試劑盒測(cè)樣品中葡萄糖含量，乘以0.9即為抗性淀粉的量。

　　

　　葡萄糖含量的測(cè)定

　　

　　根據(jù)葡萄糖試劑盒以及使用說(shuō)明書，用分光光度計(jì)測(cè)定樣品中葡萄糖的含量，以蒸餾水為空白管，以試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)液為標(biāo)準(zhǔn)管，把試劑與工作液按一定比例混合，置37℃水浴15min，以空白管調(diào)零，在505nm波長(zhǎng)下讀取各管吸光度值。